Atividade citotóxica de fungos endofíticos associados à Clusia arrudae Planchon & Triana (Clusiaceae).

dc.contributor.advisorRosa, Luiz Henriquept_BR
dc.contributor.authorSilva Filho, Antonio Cesar Corrêa
dc.date.accessioned2013-06-19T16:39:46Z
dc.date.available2013-06-19T16:39:46Z
dc.date.issued2012
dc.description.abstractOs fungos são organismos capazes de sobreviver isoladamente ou em relações simbióticas com outros organismos. Nos tecidos vegetais os fungos colonizam espaços intracelulares de plantas sem causar dano aparente ao seu hospedeiro, os quais são chamados de endofíticos e por colonizar estes espaços e apresentar constante interação com seu hospedeiro, estes fungos são capazes de produzir diferentes metabólitos bioativos. O câncer, ainda hoje, é uma doença que acomete milhares de pessoas ao redor do mundo. A busca por novos compostos com atividade antitumoral, principalmente oriundos direta ou indiretamente de vegetais, são importantes para obtenção de tratamentos mais eficazes e com menos efeitos colaterais. Neste estudo, 30 exemplares de Clusia arrudae Planchon & Triana tiveram suas folhas e caules coletados e inoculados em placas de Petri contendo meio Agar Dextrosado Batata (BDA) para isolamento dos seus fungos endofíticos associados. Um total de 100 isolados de fungos, agrupados em 21 morfotipos, foram obtidos; destes 63 do caule e 37 das folhas. Os fungos obtidos foram submetidos à extração etanólica de seus metabólitos, os quais foram avaliados quanto à capacidade de inibir as linhagens tumorais humanas HUTU (HTB-40) e RKO (CRL-2579), bem como uma linhagem humana normal WI26VA4 (CCL-951). As linhagens celulares foram expostas aos extratos dos 41 fungos endofíticos nas concentrações de 240, 120, 60 e 30 μg/mL (p/v) e tiveram sua morfologia analisada por microscopia utilizando sondas fluorescentes para identificação do núcleo, citoesqueleto e viabilidade celular. Os ensaios de citotoxicidade, considerando a Concentração Inibitória (CI50), demonstraram que oito extratos apresentaram atividade sobre as linhagens celulares analisadas; ao ampliar a linha de corte para CI55, quatro extratos apresentaram tendência à toxicidade. Os fungos produtores de extratos bioativos foram identificados por meio do sequenciamento da região ITS do rDNA gene. Os extratos dos fungos Pleosporales sp. UFMGCB 5502, Pleosporales sp. UFMGCB 5467, Pleosporales sp. UFMGCB 5485, Xylaria sp. UFMGCB 5500 e Pleosporales sp. UFMGCB 5498. apresentaram toxicidade sobre a linhagem normal de pulmão WI26VA4. Dos extratos que apresentaram toxicidade, apenas o extrato do fungo Pleosporales sp. UFMGCB 5502 também apresentou atividade antitumoral para a HUTU, juntamente com Pleosporales sp. UFMGCB 5478 e Pleosporales sp. UFMGCB 5533. Para linhagem RKO, somente o extrato do fungo Pleosporales sp. UFMGCB5460 exerceu citoxicidade. Considerando o valor de CI55, os fungos UFMGCB 5534, UFMGCB 5539, UFMGCB 5508 UFMGCB 5489 mostraram toxicidade para todas as linhagens. Os fungos que causam citoxicidade para a célula RKO foram predominantemente isolados dos caules e para a célula HUTU das folhas, independente do morfotipo encontrado. Os fungos obtidos das folhas causaram quebra do citoesqueleto e as células permaneceram vivas quando analisadas pelo kit de viabilidade celular. Já os fungos obtidos do caule causaram aglutinação e perda de adesão celular e indicio de morte. A partir destes resultados podemos concluir que a comunidade de fungos endofíticos associados a C. arrudae são capazes de produzir metabólitos com atividade citotóxica em linhagens tumorais humanas in vitro e alguns extratos também se mostraram tóxicos para células normais.pt_BR
dc.description.abstractenFungi are organisms capable of surviving alone or in symbiotic relationships with other organisms. In plant fungi colonize intracellular spaces of plants tissue without causing apparent harm to their host, which are called endophytes and colonize these areas and have constant interaction with its host, these fungi are capable of producing different bioactive metabolites. Cancer, even today, is a disease that affects thousands of people around the world. The search for new compounds with antitumor activity, mainly arising directly or indirectly from plants, are important for obtaining more effective treatments with fewer side effects. In this study, 30 specimens of Clusia arrudae Planchon & Triana had their leaves and stems collected and inoculated in Petri dishes containing Potato Dextrose Agar (PDA) for isolation of endophytic fungi associated with her. A total of 100 strains of fungi, grouped into morphotypes 21 were obtained; 63 of the stem and leaves 37. The fungi were subjected to ethanol extraction of metabolites, which were evaluated for their ability to inhibit human tumor cell lines HUTU (HTB-40) and RKO (CRL-2579), as well as a normal human WI26VA4 line (CCL-951 .) The cell lines were exposed to extracts of the 41 endophytic fungi at concentrations of 240, 120, 60 and 30 μg / mL (w / v) and their morphology were examined by fluorescent microscopy using probes for identification of the nucleus, the cytoskeleton and the cell viability. The cytotoxicity assays, considering the inhibitory concentration (IC50), showed that eight extracts showed activity against cell lines analyzed, by increasing the cutting line for CI55, four extracts showed a tendency to toxicity. The fungi that produce bioactive extracts were identified by sequencing of the ITS region of rDNA gene. Extracts of the fungus Pleosporales sp. UFMGCB 5502, Pleosporales sp. UFMGCB 5467, Pleosporales sp. UFMGCB 5485, Xylaria sp. UFMGCB 5500 and Pleosporales sp. UFMGCB 5498. showed toxicity on normal strain WI26VA4 lung. Extracts that were toxic, only the extract of the fungus Pleosporales sp. UFMGCB 5502 also showed antitumor activity to the Hutu, along with Pleosporales sp. UFMGCB 5478 and Pleosporales sp. UFMGCB 5533. For RKO line, only the extract of the fungus Pleosporales sp. UFMGCB5460 exerted cytotoxicity. Considering the value of CI55, fungi UFMGCB 5534, UFMGCB 5539, 5508 UFMGCB UFMGCB 5489 showed toxicity for all strains. The fungi that cause cytotoxic to RKO cells were predominantly of the isolated stem and leaves the cell Hutu, regardless of morphotype found. The fungi obtained from the leaves of the cytoskeleton and cause break the cells remained alive when reviewed by Kit cell viability. Since the fungi obtained from the stem caused clumping and loss of cell adhesion and hint of death. From these results we conclude that the community of endophytic fungi associated with C. arrudae are capable of producing metabolites with cytotoxic activity on human tumor cell lines in vitro and some extracts were also toxic to normal cells.
dc.identifier.citationSILVA FILHO, A. C. C. Atividade citotóxica de fungos endofíticos associados à Clusia arrudae Planchon & Triana (Clusiaceae). 2012. 98 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2012.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/2943
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.subjectFungos endofíticospt_BR
dc.subjectClusea arrudaept_BR
dc.subjectAtividade citotóxicapt_BR
dc.titleAtividade citotóxica de fungos endofíticos associados à Clusia arrudae Planchon & Triana (Clusiaceae).pt_BR
dc.typeDissertacaopt_BR

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