Influência da infecção por uma cepa policlonal do Trypanosoma cruzi sobre a resposta imune no coração e cólon durante a fase aguda da infecção experimental de camundongos.

Abstract

Fatores intrínsecos ao Trypanosoma cruzi e relacionados ao hospedeiro agem sobre a patogênese da doença de Chagas. Neste contexto, o polimorfismo genético do parasito parece ter um papel crítico no prognóstico da doença, e tem sido demonstrada uma associação entre o desenvolvimento das distintas formas clínicas e a distribuição geográfica de cepas do T. cruzi. Diante disso, esse projeto propôs avaliar a influência do polimorfismo biológico e molecular de subpopulações do T. cruzi sobre a resposta inflamatória no coração e cólon durante a fase aguda da infecção experimental. A primeira etapa consistiu na caracterização biológica (meio de cultura acelular e celular) e do perfil gênico (Low-Stringency Single Specific Primer- Polymerase Chain Reaction/LSSP-PCR) de subpopulações do parasito obtidas a partir de hemoculturas periódicas (3, 6 e 12 meses após a infecção-mai) em 24 camundongos experimentalmente infectados com 5000 formas tripomastigotas sanguíneas da cepa Berenice- 78 (Be-78 parental) do T. cruzi. Foi possível identificar isolados com comportamento in vitro, assim como perfis de assinatura gênica, distintos do observado para a cepa Be-78 parental. Em alguns casos, os isolados mostraram certo grau de semelhança com a cepa Berenice-62 (Be-62), isolada da paciente Berenice, em fase crônica tardia, 16 anos antes do xenodiagnóstico que originou a cepa Be-78. Esses dados sugerem a presença de distintas subpopulações na cepa Be-78 e reafirmam a plasticidade do parasito frente à pressão seletiva exercida pela interação parasito-hospedeiro. Na segunda etapa, a infecção com um isolado selecionado na primeira etapa, que apresentou perfil distinto da cepa parental, foi comparada com a infecção com as cepas Be-78 parental e Be-62 em modelo murino com o objetivo de investigar a participação de diferentes subpopulações do parasito sobre o desenvolvimento do processo inflamatório durante os estágios iniciais da doença experimental. Nossos dados demonstraram um perfil cardiomiotrópico e retardo no controle da parasitemia na infecção pela cepa Be-78 parental, seguido por processo inflamatório intenso ao final da fase aguda, ao contrário da cepa Be-62 e do isolado Be-78is5-3mai, que por sua vez, apresentou-se preferencialmente parasitando o cólon, com parasitemia significativamente superior, porém, controlada precocemente, e processo inflamatório intenso ao longo da fase aguda. No coração, apesar de já observada no grupo Be-62 aos 14dai, no 28º, a densidade de macrófagos, linfócitos T CD4+ e CD8+ foi semelhante entre as cepas Be-62 e Be-78 parental, com sobreposição de células T CD8+ em relação às células T CD4+. O isolado Be-78is5-3mai apresentou miocardite, embora de menor intensidade, também apenas no 28ºdai, composta essencialmente por macrófagos e linfócitos T CD8+. De forma diferente ao observado no coração, o perfil de resposta imunológica no cólon foi cepa-dependente. Apenas o grupo Be- 78 parental apresentou aumento precoce de células T CD4+, que foram substituídas por células T CD8+ e linfócitos B, no 14ºdai. Todos esses resultados são condizentes com o comportamento da parasitemia e do parasitismo tecidual nesse grupo. Embora com menor intensidade, o perfil imunofenotípico detectado nos animais infectados com o isolado Be- 78is5-3mai foi próximo àquele demonstrado pelo grupo Be-62, e sobretudo, distinto da cepa Be-78 parental. Nas primeiras duas semanas de infecção, o processo inflamatório foi constituído principalmente por macrófagos e células T CD8+, com aumento expressivo de linfócitos T CD4+ apenas ao final da fase aguda. Estes resultados indicam que o isolado Be- 78is5-3mai, consistente com os dados da avaliação in vitro, demonstrou durante a fase aguda da infecção de camundongos BALB/c, um comportamento intermediário entre a cepas de referência utilizadas, apresentando virulência (parasitemia e mortalidade) compatível com a cepa Be-78 parental, no entanto, perfil histotrópico compartilhado com a cepa Be-62, reforçando a hipótese de que a infecção a longo prazo com a cepa Be-78 foi capaz de selecionar uma subpopulação que compartilha características com a cepa Be-62, ambas originada da paciente Berenice, com 16 anos de intervalo entre as coletas.